Desarrollo de una formulación estable de ureasa líquida para la determinación de urea en suero / Development of a stable formulation of liquid urease for determination of serum urea

INTRODUCCIÓN: la determinación de urea en suero reviste gran importancia para el diagnóstico clínico de diversas afecciones de origen renal. Los métodos más aplicados para este fin implican el uso de la enzima ureasa por su alta especificidad en la hidrólisis de este analito, entre los cuales el método de Berthelot, emplea la ureasa en el primer paso de la reacción, seguido de una reacción colorimétrica del amoníaco liberado. La presentación de la ureasa en forma líquida es uno de los elementos que hacen más sencillo este proceso, de fácil y rápida ejecución con resultados confiables. OBJETIVO: desarrollar una solución de ureasa estable, como componente del juego de diagnosticador de urea en suero. MÉTODOS: se diseñó y optimizó la formulación teniendo en cuenta: la concentración de la enzima, las soluciones buffer, los preservos y los compuestos orgánicos polihidroxilados para lograr un producto en forma líquida estable. Se evaluó la especificidad, precisión, linealidad, exactitud (comparación de métodos) y la sensibilidad del método; así como la estabilidad en vida de estante de 2 a 8 °C, por un período de 18 meses. RESULTADOS: se logró un reactivo líquido estable (> 12 meses de 2 a 8 °C), donde el método analítico resultó ser específico y lineal hasta 30 mmol/L de urea (r2= 0,999), sensible, preciso coeficiente de variación, CV< 3 por ciento) y exacto (r 0,999), satisfactorio para el uso al que se destina el producto, con calidad analítica comparable con los existentes en el mercado. CONCLUSIONES: el desarrollo de la formulación de ureasa líquida estable, permitirá introducir este componente esencial, en el juego de reactivos de urea que oferta la Industria Nacional al Sistema de Salud de acuerdo con los requisitos vigentes (Reg. 8-2001) para su comercialización(AU)

INTRODUCTION: determination of serum urea has great importance for the clinical diagnosis of several renal illnesses. The most implemented methods involve the use of the urease enzyme because of its high specificity for this analyte hydrolysis; the Berthelot method uses urease in the first reaction step followed by colorimetric reaction of the released ammonium. The presentation of urease in liquid form is one of the elements that make this process simpler, of easy and fast application with reliable results. OBJECTIVE: to develop a stable urease solution as part of the diagnostic set for serum urea. Methods: THE ADEQUATE FORMULATION WAS DESIGNED AND OPTIMIZED BY TAKING INTO account the enzyme concentration, the buffer solutions, the preserves and the polyhydroxyled organic compounds to attain a final stable liquid product. The parameters called specificity, precision, linearity, accuracy (comparison of methods) and sensitivity of the method were all evaluated in addition to the shelf life at 2 a 8 °C for 18 months. RESULTS: astable liquid reagent (over 12 months at 2 a 8 °C ) was reached; the analytical method proved to be specific and linear up to 30 mmol/L of urea (r2= 0,999), sensitive, precise, with variation coefficient lower than 3 percent and accurate ((r 0,999), satisfactory for the intended use of the product and the analytical quality comparable to that of the already existing products. CONCLUSIONS: the development of the stable liquid urease formulation will allow introducing this essential component in the reagent set for urea offered by the national industry to the healthcare system according to the requirements for commercialization (Reg 8-2001)(AU)

Desarrollo de una formulación estable de ureasa líquida para la determinación de urea en suero / Development of a stable formulation of liquid urease for determination of serum urea

Introducción: la determinación de urea en suero reviste gran importancia para el diagnóstico clínico de diversas afecciones de origen renal. Los métodos más aplicados para este fin implican el uso de la enzima ureasa por su alta especificidad en la hidrólisis de este analito, entre los cuales el método de Berthelot, emplea la ureasa en el primer paso de la reacción, seguido de una reacción colorimétrica del amoníaco liberado. La presentación de la ureasa en forma líquida es uno de los elementos que hacen más sencillo este proceso, de fácil y rápida ejecución con resultados confiables. Objetivo: desarrollar una solución de ureasa estable, como componente del juego de diagnosticador de urea en suero. Métodos: se diseñó y optimizó la formulación teniendo en cuenta: la concentración de la enzima, las soluciones buffer, los preservos y los compuestos orgánicos polihidroxilados para lograr un producto en forma líquida estable. Se evaluó la especificidad, precisión, linealidad, exactitud (comparación de métodos) y la sensibilidad del método; así como la estabilidad en vida de estante de 2 a 8 °C, por un período de 18 meses. Resultados: se logró un reactivo líquido estable (> 12 meses de 2 a 8 °C), donde el método analítico resultó ser específico y lineal hasta 30 mmol/L de urea (r2= 0,999), sensible, preciso coeficiente de variación, CV< 3 por ciento) y exacto (r³ 0,999), satisfactorio para el uso al que se destina el producto, con calidad analítica comparable con los existentes en el mercado. Conclusiones: el desarrollo de la formulación de ureasa líquida estable, permitirá introducir este componente esencial, en el juego de reactivos de urea que oferta la Industria Nacional al Sistema de Salud de acuerdo con los requisitos vigentes (Reg. 8-2001) para su comercialización(AU)

Introduction: determination of serum urea has great importance for the clinical diagnosis of several renal illnesses. The most implemented methods involve the use of the urease enzyme because of its high specificity for this analyte hydrolysis; the Berthelot method uses urease in the first reaction step followed by colorimetric reaction of the released ammonium. The presentation of urease in liquid form is one of the elements that make this process simpler, of easy and fast application with reliable results. Objective: to develop a stable urease solution as part of the diagnostic set for serum urea. Methods: the adequate formulation was designed and optimized by taking into account the enzyme concentration, the buffer solutions, the preserves and the polyhydroxyled organic compounds to attain a final stable liquid product. The parameters called specificity, precision, linearity, accuracy (comparison of methods) and sensitivity of the method were all evaluated in addition to the shelf life at 2 a 8 °C for 18 months. Results: astable liquid reagent (over 12 months at 2 a 8 °C ) was reached; the analytical method proved to be specific and linear up to 30 mmol/L of urea (r²= 0,999), sensitive, precise, with variation coefficient lower than 3 percent and accurate ((r³ 0,999), satisfactory for the intended use of the product and the analytical quality comparable to that of the already existing products. Conclusions: the development of the stable liquid urease formulation will allow introducing this essential component in the reagent set for urea offered by the national industry to the healthcare system according to the requirements for commercialization (Reg 8-2001)(AU)

Comportamiento de la pendiente en el ensayo de linealidad del Rapigluco-Test / Behavior of the slope in the rehearsal of linealidad of the Rapigluco-Test

Se estudió el comportamiento de la pendiente y el coeficiente de determinación en el ensayo de linealidad del RapiGluco-Test, a partir del análisis de los lotes producidos en 1998. Se examinaron las curvas de calibración mediante un análisis de regresión lineal simple; además, se aplicaron otras herramientas de estadística descriptiva para el análisis de los resultados. Para la evaluación de ensayo de linealidad además del coeficiente de determinación (r2³0,98), se propuso incluir la pendiente de la curva y se estableció para la aprobación del RapiGluco-Test un rango de 0,058 a 0,064(AU)

Comportamiento de la pendiente en el ensayo de linealidad del Rapigluco-Test / Behavior of the slope in the lineality test of the RapiGluco-Test

Se estudió el comportamiento de la pendiente y el coeficiente de determinación en el ensayo de linealidad del RapiGluco-Test, a partir del análisis de los lotes producidos en 1998. Se examinaron las curvas de calibración mediante un análisis de regresión lineal simple; además, se aplicaron otras herramientas de estadística descriptiva para el análisis de los resultados. Para la evaluación de ensayo de linealidad además del coeficiente de determinación (r2ü0,98), se propuso incluir la pendiente de la curva y se estableció para la aprobación del RapiGluco-Test un rango de 0,058 a 0,064

Estabilidad a largo plazo del juego de reactivos para la determinación de hemoglobina en sangre

Se estudió la estabilidad a largo plazo del juego de reactivos para la determinación de hemoglobina en sangre, basado en el comportamiento de la estabilidad física y química de los componentes del juego durante 1 año, así como también el ensayo funcional de éstos. Se estudió además el reactivo de trabajo durante 15 d. Un análisis estadístico de los resultados demostró que el juego de reactivos es estable durante los tiempos de estudio, almacenado a una temperatura de 2 a 8 EC.

The long term stability of the reagents kit to determine hemoglobin in blood, based on the physical and chemical stability of the components of the kit during a year, as well as their functional assay, were studied. The working resgent was also studied for 15 days. A statistical analysis of the results showed that the reagents kit is stable during the time under study, stored at a temperature from 2 to 8 EC.

Estabilidad a largo plazo del juego de reactivos para la determinación de hemoglobina en sangre / Long term stability of the game of reagents for the hemoglobin determination in blood

Se estudió la estabilidad a largo plazo del juego de reactivos para la determinación de hemoglobina en sangre, basado en el comportamiento de la estabilidad física y química de los componentes del juego durante 1 año, así como también el ensayo funcional de éstos. Se estudió además el reactivo de trabajo durante 15 d. Un análisis estadístico de los resultados demostró que el juego de reactivos es estable durante los tiempos de estudio, almacenado a una temperatura de 2 a 8 EC(AU)

Validación de técnicas analíticas utilizadas en el control de la calidad / Validation of analytical techniques in quality control

Se seleccionó una metodología y se elaboró un procedimiento normativo operacional para la validación de métodos analíticos, utilizados en la evaluación de las producciones actuales para los requerimientos de calidad. Se comprobó la utilidad de dicho procedimiento mediante la validación de los métodos volumétricos y espectrofotométricos que intervienen en el control de la calidad del juego de reactivos para la determinación de hemoglobina en sangre. Se demostró mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que dichos métodos son lineales ( r²>0,98), exactos (Fexp

Racionalización de la técnica para la determinación de la concentración de lidocaína al 2 por ciento / Rationalization of the technique for determining the concentration of lipocaine 2 per cent

El clorhidrato de lidocaína es un anestésico local que se utiliza tanto por vía endovenosa como subcutánea, en dependencia de su forma de presentación, con o sin preservo respectivamente. La determinación de la concentración de clorhidrato de lidocaína en el inyectable se realiza mediante un método anhidrovolumétrico que requiere un gasto considerable de reactivo de importación. Para racionalizar esta técnica, se realizaron ensayos preliminares en los cuales se varió el volumen de extrayente y el número de extracciones. Los mejores resultados se obtuvieron con 10 mL de cloroformo en 3 extracciones, lo que permitió un ahorro aproximado del 70 por ciento de este solvente

Racionalización de la técnica para la determinación de la concentración de lidocaína al 2 por ciento / Rationalization of the technique for determining the concentration of lipocaine 2 per cent

El clorhidrato de lidocaína es un anestésico local que se utiliza tanto por vía endovenosa como subcutánea, en dependencia de su forma de presentación, con o sin preservo respectivamente. La determinación de la concentración de clorhidrato de lidocaína en el inyectable se realiza mediante un método anhidrovolumétrico que requiere un gasto considerable de reactivo de importación. Para racionalizar esta técnica, se realizaron ensayos preliminares en los cuales se varió el volumen de extrayente y el número de extracciones. Los mejores resultados se obtuvieron con 10 mL de cloroformo en 3 extracciones, lo que permitió un ahorro aproximado del 70 por ciento de este solvente(AU)

Conservación de Soluciones de Referencia de Acido Urico / Preservation of reference solutions of uric acid

Se estudiaron diferentes agentes preservantes para seleccionar el que proporcionara a las soluciones de referencia de ácido úrico un mayor tiempo de vida útil. Se investigó la estabilidad de las soluciones en un rango de concentraciones de 2 a 10 mg/dL (199-595 µmol/L), manteniéndolas en diferentes condiciones de almacenamiento: 2-8 ºC, temperatura ambiente y 37 ºC. Los mejores resultados se observaron al emplear timerosal como preservo, ya que el coeficiente de correlación obtenido mediante un análisis de regresión lineal fue mayor que 0,9980 en el transcurso de 1 año para las soluciones almacenadas de 2 a 8 ºC

Conservación de Soluciones de Referencia de Acido Urico / Preservation of reference solutions of uric acid

Se estudiaron diferentes agentes preservantes para seleccionar el que proporcionara a las soluciones de referencia de ácido úrico un mayor tiempo de vida útil. Se investigó la estabilidad de las soluciones en un rango de concentraciones de 2 a 10 mg/dL (199-595 µmol/L), manteniéndolas en diferentes condiciones de almacenamiento: 2-8 ºC, temperatura ambiente y 37 ºC. Los mejores resultados se observaron al emplear timerosal como preservo, ya que el coeficiente de correlación obtenido mediante un análisis de regresión lineal fue mayor que 0,9980 en el transcurso de 1 año para las soluciones almacenadas de 2 a 8 ºC(AU)